细胞衰老会导致膜流动性降低、内吞能力减弱以及胞外RNA酶活性增加，这让外源mRNA（尤其是大分子治疗片段）很难送入细胞内部。为了突破这一技术瓶颈，JoVE期刊发布了一项优化的高效反向转染方案。研究团队通过将转染复合物预先铺在培养皿表面，配合修饰后的mRNA、酶抑制剂以及调节内吞环境等组合拳，成功将约5-kb的hTERT（人端粒酶逆转录酶）mRNA送入了衰老的人类成纤维细胞，转染效率飙升至50%-80%。实验显示，单次转染即可实现端粒延长，三次连续转染能带来显著的端粒增长，并在72-96小时内让细胞的衰老标志物（如β-半乳糖苷酶、p16和p21）明显下降，细胞形态恢复年轻并延长了寿命。由于输入的mRNA会在数天内自然降解，因此不会导致细胞无限增殖的永生化风险。这项技术为清除衰老细胞特征提供了一种安全高效的实用工具。
📎 来源：Journal of visualized experiments : JoVE | 查看原文